1分鐘學實驗：如何用atp熒光檢測儀準確測定菌液濃度？

在微生物相關的實驗中，大腸桿菌是*常用的菌株。

關于大腸桿菌濃度的測定以及計算有許多方法。今天就給大家介紹以分光光度計以及熒光光度計連續監測的方法，通過檢測培養液吸光強度和熒光強度隨時間的變化并建立微生物生長曲線，確定吸光強度和熒光強度檢測閾值。

據此測定達到閾值吸光強度和熒光強度所需時間，推導并驗證了檢測時間與菌初始濃度之間的線性關系，建立閾值檢測曲線。

利用定時培養檢測方法建立定時檢測曲線。采用上述兩種定量方法所有微生物檢測約10h可完成。

1、將菌種接種于斜面培養24 h，用接種環挑取菌體于無菌水中，然后依次稀釋10倍制備一系列濃度梯度的菌懸液，并用97孔定量盤檢測其濃度。

2、確定檢測波長在無菌的試劑中加入大腸桿菌后37℃培養12 h，以無菌的試劑為空白，用紫外分光光度計對其進行全波長掃描以確定其**檢測波長。在激發光為365 nm條件下，用熒光光度計進行全波長掃描以確定熒光物質的**檢測波長。

3、確定檢測國值用無菌水將培養試劑溶解，制備兩倍濃度的培養試劑。將等體積的兩倍濃度試劑和菌懸液混合后密封，37℃培養。每隔20 min檢測吸光強度和熒光強度變化，根據過程變化確定檢測閾值。

4、定時培養方式2-3 mL體系在比色皿封閉體系中或無色透明5 mL玻璃瓶中培養，每隔一定時間檢測培養體系中410 nm處及365 nm激發光所激發熒光變化。此種培養方式便于無菌培養、連續檢測或定時檢測，不需要連續取樣。過程簡單、操作方便。

此方法通過atp熒光檢測儀檢測和觀察微生物生長過程中的變化，可確定吸光強度（△A=0.1）和熒光強度（△F=0.1）檢測閾值。經過數學推導和實驗驗證，建立大腸桿菌初始濃度與閾值檢測時間之間的線性關系。利用此曲線方程，只需記錄閾值所需的檢測時間即可推算出水中微生物的初始濃度，計算過程十分簡單。